De ELISA-test detecteert tal van ziekten en wordt daarom op grote schaal gebruikt in de geneeskunde en meer. De ELISA-test is echter vooral bekend vanwege de diagnose van de ziekte van Lyme. Wat is de ELISA-test? Hoe de resultaten interpreteren? Wat is de prijs van de test?

Inhoud:

  1. ELISA-test - wat detecteert het? Gebruik van de ELISA
  2. ELISA-test - wat is de test?
  3. ELISA-test en de ziekte van Lyme - wanneer uitvoeren?
  4. ELISA-test - prijs. Hoeveel kost een ELISA-test
  5. ELISA-test - resultaten. Kunnen het valse positieven zijn?
  6. ELISA-test - resultaten. Kunnen ze vals negatief zijn?

ELISA-test , d.w.z. de enzyme-linked immunosorbent-assay, is een veelgebruikte laboratoriummethode die onder andere dient voor de kwantitatieve detectie van antistoffen in het bloed

HierdoorELISA-testgevondentoepassingbij de diagnose van bacteriële ziekten, zoalsZiekte van Lyme met Lyme.

Het voordeel van de ELISA-methode is de eenvoud, snelle uitvoering en hoge gevoeligheid. De ELISA-methode wordt uitgevoerd met behulp van speciale plastic platen met putjes gevuld met bijvoorbeeld Borrelia-eiwitten (antigenen) en specifieke monoklonale antilichamen, die zijn ontworpen om antilichamen in het monster van de patiënt te detecteren.

ELISA-test - wat detecteert het? Gebruik van de ELISA

De hoge gevoeligheid en eenvoud van de ELISA-methode maakten het toepasbaar bij de diagnose van vele ziekten, maar het is vooral bekend als de diagnostische methode van de ziekte van Lyme.

Bij de diagnose van Lyme-borreliose, de zogenaamde indirecte ELISA, waarmee specifiek IgM of IgG in het geteste materiaal kan worden gedetecteerd. Op dezelfde manier kunnen antistoffen worden opgespoord voor diagnostische doeleinden:

  • virale infecties: herpesvirussen (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, hepatitisvirussen (HBV en HCV)
  • protozoaire infecties: toxoplasmose, giardiasis
  • auto-immuunziekten: coeliakie (anti-tTG- of anti-DPG-antilichamen), de ziekte van Hashimoto (anti-TG- en anti-TPO-antilichamen), inflammatoire darmziekten (anti-ASCA- en anti-ANCA-antilichamen)
  • parasitaire ziekten en allergieën,waarin specifieke IgE-antilichamen worden gedetecteerd. Hun verhoogde niveau kan wijzen op de aanwezigheid van allergieën, bijv. voor pollen en voedsel, of parasitaire invasies (gewapende lintworm, menselijke rondworm)

Er zijn ook aanpassingen aan de ELISA-methode (de zogenaamde sandwich-ELISA), die de detectie van een getest monster van andere eiwitten dan antilichamen mogelijk maken. Dan is het doel van het onderzoek om in het biologische materiaal te detecteren:

  • fragmenten van virussen of bacteriën, meestal zijn dit antigenen die specifiek zijn voor een bepaalde ziekteverwekker
  • serumhormonen, bijv. oestrogeen, prolactine, TSH, fT4, cortisol
  • enzymen bijv. calprotectine, pancreas-elastase, alkalische fosfatase
  • tumormarkers, bijv. CA-125
  • aanwezigheid van medicijnen in het serum

Deze methode wordt ook gebruikt in de voedingsindustrie, waar sporen van allergenen (bijv. melk, pinda's), GGO's of toxines in voedsel kunnen worden gedetecteerd.

ELISA-test - wat is deze test?

De diagnose van bijvoorbeeld Lyme-borreliose met behulp van de ELISA-methode bestaat uit het detecteren van immuuneiwitten in biologisch materiaal - antilichamen die ontstaan ​​tijdens de reactie tegen Borrelia-antigenen.

Antilichamen worden getest in twee klassen, IgM en IgG. IgM's zijn de eerste antilichamen die in het lichaam verschijnen bij contact met bacteriën en na verloop van tijd afnemen.

Hun plaats wordt ingenomen door hardnekkigere IgG-antilichamen die tientallen jaren in het lichaam kunnen blijven.

Op deze manier wordt de aanwezigheid van bacteriën in het lichaam indirect getest door het detecteren van antilichamen die specifiek gericht zijn tegen Borrelia-spirocheten.

Antilichamen in verschillende stadia van infectie kunnen gericht zijn tegen verschillende Borrelia-eiwitten. In een vroeg stadium is dat bijvoorbeeld het eiwit p41.

In de latere stadia beginnen er steeds meer eiwitten te verschijnen, zoals p21, p30, p39, p43. Dit is de reden waarom de diagnose van de ziekte van Lyme extreem moeilijk is.

De selectie van bacteriële eiwitten is van groot belang om de test een hoge diagnostische waarde te geven. Daarom moeten bij de diagnose van de ziekte van Lyme routinematig II-generatie of III-generatie ELISA-tests worden gebruikt, waarbij de sets eiwitten worden geselecteerd om het meest betrouwbare resultaat te verkrijgen.

ELISA-test en de ziekte van Lyme. Wanneer optreden?

Lyme-borreliose is een bacteriële ziekte die wordt veroorzaakt door de bacterie Borrelia burgdorferi en zijn vele variëteiten.

Diagnose van ziekten is niet eenvoudig vanwege de complexiteit van de immuunrespons tegen Borrelia en de onvolkomenheden van laboratoriummethoden.

De meest gebruikte laboratoriummethode is de zeer gevoelige ELISA-methode die specifieke antilichamen detecteert die zijn opgewekt tegen bacteriële eiwitten.

Bij de diagnose van Lyme-borreliose wordt gebruik gemaakt van een indirecte ELISA-methode waarbij de volgende stadia worden onderscheiden:

  • incubatie van de putjes op de plaat met materiaal dat van de patiënt is verzameld, bijvoorbeeld serum. Als er antistoffen tegen Borrelia in het geteste materiaal zitten, binden ze aan eiwitten onderaan het reactieputje
  • dan wordt het overtollige serum uitgespoeld met een speciale wasvloeistof (buffer) en de zogenaamde conjugaat, d.w.z. een antilichaam gekoppeld aan een enzym dat bindt aan eerder gekoppelde antilichamen in de reactieputjes
  • Substraat voor het conjugaat wordt later toegevoegd en er is geen (positieve) of geen kleurreactie (negatief)
  • de laatste stap is het aflezen door de lezer (spectrofotometer) van de concentratie antilichamen tegen Borrelia in het serum van de patiënt

De ELISA-methode voor de ziekte van Lyme wordt uitgevoerd met bloed, en bij neurologische symptomen (neuroborreliose), ook met het hersenvocht.

De gewrichtsvloeistof mag niet worden getest, omdat de kans op fout-positieve resultaten groot is.

De basis voor de diagnose van de ziekte zijn klinische symptomen die erop wijzen, bevestigd door de resultaten van laboratoriumtests.

Het toevoegen van een laboratoriumtestresultaat zonder de aanwezigheid van symptomen geeft geen toestemming voor de diagnose van de ziekte van Lyme, aangezien is aangetoond dat ook bij gezonde mensen antilichamen tegen Borrelia-spirocheten worden aangetroffen.

Serologische diagnose van Lyme-borreliose begint met een semi-kwantitatieve ELISA-screeningtest. Als het resultaat negatief is, betekent dit dat er geen Borrelia-spirocheten zijn gedetecteerd of dat het resultaat vals-negatief is.

Als het resultaat positief of zwak positief (dubbelzinnig) is, bevestigende Western-blot-testen, wat zeer specifiek is.

Dit is om de "waarheid" van de met de ELISA-methode verkregen resultaten te bevestigen. Tijdens de diagnostiek kunt u geen van bovenstaande stappen overslaan en bijvoorbeeld een diagnose stellen met de Western Blot-methode of een diagnose stellen op basis van alleen een positief resultaat met behulp van de ELISA-methode.

In Polen eindigt de diagnose van de ziekte van Lyme vaak in de eerste fase van de screening, wat leidt tot een verkeerde interpretatie van positieve of zwak positieve resultaten.

Nuttig om te weten

ELISA-test - prijs. Hoeveel kost een ELISA-test

De test kost ongeveer 60zloty en is meteen gemaakt. U kunt echter ongeveer drie maanden wachten op de resultaten van de verwijzing.

ELISA-test - resultaten. Kunnen het valse positieven zijn?

Vals-positieve resultaten zijn het gevolg van kruisreactiviteit van IgM-antilichamen met andere eiwitten. Antilichamen die door het lichaam worden geproduceerd, kunnen een antigeen van andere micro-organismen "onjuist" herkennen als het Borrelia-antigeen.

De meest voorkomende "fouten" komen voor bij mensen die besmet zijn met treponema pallidum, herpesvirussen en bij mensen met systemische lupus erythematosus en andere reumatische aandoeningen.

ELISA-test - resultaten. Kunnen ze vals negatief zijn?

Vals-negatieve resultaten kunnen verschijnen in het vroege stadium van infectie, daarna moet de test na ongeveer 3-4 weken worden herhaald. Dit heet serologisch venster, d.w.z. de beginperiode van infectie waarin het lichaam er nog niet in is geslaagd om specifieke antilichamen aan te maken.

Zo ook bij immuungecompromitteerde mensen die niet genoeg antistoffen aanmaken

Een groot probleem, vooral bij zeer intense infecties, is het uiterlijk van de zogenaamde immuuncomplexen die bestaan ​​uit Borrelia spirochetes-antigenen en specifieke antilichamen daarvoor.

Dit maakt de antilichamen "onzichtbaar" voor veelgebruikte methoden zoals ELISA, en hoewel ze aanwezig zijn in het geteste materiaal, kunnen ze niet worden gedetecteerd.

In dergelijke gevallen kan het laboratorium gebruik maken van het afbreken van immuuncomplexen. Deze behandeling is bedoeld om de antilichamen vrij te maken. Deze methode wordt echter niet veel gebruikt vanwege het gebrek aan standaardisatie in laboratoria.

Nuttig om te weten

Waarom is de diagnose van de ziekte van Lyme niet gemakkelijk?

Dit komt door de complexiteit van de immuunrespons tegen Borrelia en de beperkingen van laboratoriummethoden. De diversiteit aan variëteiten en de opkomst van nieuwe infecties die infecties veroorzaken, vooral op het Europese continent, vergemakkelijken de ontwikkeling van effectieve diagnostische methoden niet.

De laatste tijd zijn er in Europa meer variëteiten verschenen, zoals Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana en Borrelia spielmanii. Bovendien kunnen Borrelia-spirocheten in het lichaam in cysten veranderen of op plaatsen in het lichaam blijven die niet toegankelijk zijn voor de cellen van het immuunsysteem.

Zo "onzichtbaar" zijn voor het immuunsysteem. Daarnaast is aangetoond dat de weefsels fragmenten van bacteriën kunnen bevatten die sterk pro-inflammatoire eigenschappen hebben. Ze worden verondersteld verantwoordelijk te zijn voor de chronische symptomen van de ziekte van Lyme, ondanks negatieve resultaten in het onderzoeklaboratorium

Referenties

1. Witecka-Knysz E. et al. Ziekte van Lyme: waarom is de diagnose zo moeilijk? Laboratorium diagnosticus april 2007.2. Moore A. et al. Huidige richtlijnen, gemeenschappelijke klinische valkuilen en toekomstige aanwijzingen voor laboratoriumdiagnose van de ziekte van Lyme, Verenigde Staten. Emerg Infect Dis. 2016 juli 22 (7) .3. Laboratoriumdiagnose van door teken overgedragen ziekten Aanbevelingen van de werkgroep: Nationale Kamer van Laboratoriumdiagnostica, Nationaal Instituut voor Volksgezondheid-Nationaal Instituut voor Hygiëne, Nationaal adviseur op het gebied van infectieziekten, Afdeling Infectieziekten en Neuro-infecties, Medische Universiteit van Białystok, Polish Society of Virology, Warschau 2014. Hosseini S. i co: Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) Van A tot Z. Springer 2022.Over de auteur src="badania/8159880/test_elisa_-_co_wykrywa_jak_odczyta_wyniki_cena_testu_2.JPG.webp" />Karolina Karabin, MD, PhD, moleculair bioloog, laboratoriumdiagnose, Cambridge Diagnostics PolskaEen bioloog van beroep, gespecialiseerd in microbiologie, en een laboratorium diagnosticus met meer dan 10 jaar ervaring in laboratoriumwerk. Afgestudeerd aan het College voor Moleculaire Geneeskunde en lid van de Poolse Vereniging voor Menselijke Genetica Hoofd van onderzoeksbeurzen bij het Laboratorium voor Moleculaire Diagnostiek van de Afdeling Hematologie, Oncologie en Interne Ziekten van de Medische Universiteit van Warschau. Ze verdedigde de titel van doctor in de medische wetenschappen op het gebied van medische biologie aan de 1e Faculteit der Geneeskunde van de Medische Universiteit van Warschau. Auteur van vele wetenschappelijke en populaire wetenschappelijke werken op het gebied van laboratoriumdiagnostiek, moleculaire biologie en voeding. Als specialist op het gebied van laboratoriumdiagnostiek leidt hij dagelijks de inhoudelijke afdeling van Cambridge Diagnostics Polska en werkt hij samen met een team van voedingsdeskundigen van de CD Dietary Clinic. Zijn praktische kennis over diagnostiek en dieettherapie van ziekten deelt hij met specialisten op congressen, trainingen en in tijdschriften en websites. Ze is vooral geïnteresseerd in de invloed van de moderne levensstijl op moleculaire processen in het lichaam.

Categorie:

Onderzoek