- PCR (test) - wat is de PCR-techniek
- PCR (test) - toepassing van de PCR-methode
- PCR (test) en de ziekte van Lyme
- PCR - resultaten. Kunnen het valse positieven zijn?
- PCR - resultaten. Kunnen ze vals-negatief zijn
Help de ontwikkeling van de site en deelt het artikel met vrienden!
PCR is een test die is gebruikt bij de diagnose van veel ziekten. De PCR-methode maakt het mogelijk om de directe aanwezigheid van bacteriën in het organisme aan te tonen, en specifiek het DNA ervan. PCR wordt onder meer gebruikt in bij de diagnose van de ziekte van Lyme. Wat is de PCR-techniek? Wat is re altime PCR?
Inhoud:
- PCR (test) - wat is de PCR-techniek
- PCR (test) - toepassing van de PCR-methode
- PCR (test) - Ziekte van Lyme
- PCR (test) - resultaten. Kunnen het valse positieven zijn?
- PCR (test) - resultaten. Kunnen ze vals-negatief zijn
PCR(polymerasekettingreactie) is de primaire methode die wordt gebruikt in genetische en moleculaire laboratoria. Het werd in 1983 ontwikkeld door Kara Mullis, die er in 1993 de Nobelprijs voor kreeg.
PCR (test) - wat is de PCR-techniek
PCR-testbestaat uit meervoudige amplificatie (meestal in 30-40 cycli) van een specifiek fragment van DNA, bijv. genen die coderen voor Borrelia-eiwitten, met behulp van het polymerase-enzym.
Vervolgens worden speciale moleculaire kleurstoffen gebruikt om het geamplificeerde DNA-fragment zichtbaar te maken. PCR is dankzij de amplificatie van specifieke DNA-fragmenten een ultragevoelige methode.
In de PCR-methode worden DNA-fragmenten geamplificeerd met behulp van specifieke primerparen voor een bepaald gebied van het bacteriële DNA. PCR-doelgebieden die bij de diagnose van de ziekte van Lyme worden gebruikt, zijn bijvoorbeeld genen die coderen voor eiwitten, b.v. 16S rDNA, recA, fla, p66, OspA
Het biologische materiaal van waaruit de test kan worden uitgevoerd is:
- bloed
- huidsectie van migrerend erytheem
- hersenvocht
- synoviaal of kraakbeenvocht
- urine
PCR (test) - toepassing van de PCR-methode
Naast de diagnose van Lyme-borreliose, kan de PCR-methode specifieke DNA-fragmenten van andere micro-organismen of mensen detecteren. Daarom wordt de PCR-methode ook gebruikt in:
- diagnose en monitoring van virale infecties: herpesvirussen (herpesvirus, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, hepatitisvirussen (HBV en HCV)
- diagnose en monitoring van bacteriële infecties, vooral die bacteriën,die niet kunnen worden geïdentificeerd door middel van culturen, bijvoorbeeld tuberculose
- diagnose en monitoring van neoplastische ziekten: leukemie, borstkanker, colorectale kanker, longkanker
- diagnose van aanleg voor kanker: borst- en eierstokkanker (BRCA1- en BRCA2-genen), colorectale kanker (APC- en CHEK2-genen)
- diagnose van genetische ziekten: hemochromatose (HFE-gen), thalassemie (HBA1- en HBA2-genen), coeliakie (HLA-genen)
- vaderschapstesten, die de DNA-compatibiliteit van het kind en de vader detecteren
Momenteel zijn er veel aanpassingen aan de PCR-methode. Bij de diagnose van de ziekte van Lyme worden bijvoorbeeld voornamelijk de methoden van geneste PCR (nested PCR) en real-time PCR ( ) gebruikt. De laatste is een kwantitatieve methode en maakt het mogelijk om het exacte aantal Borrelia-DNA-kopieën in het geteste biologische materiaal te bepalen.
PCR (test) en de ziekte van Lyme
De basis voor de diagnose van de ziekte van Lyme is serologisch onderzoek. Er zijn echter klinische situaties die ervoor kunnen zorgen dat deze tests vals-negatief zijn:
- serologisch venster, d.w.z. de beginperiode van infectie waarin het lichaam nog geen specifieke IgM- en IgG-antilichamen tegen Borrelia aanmaakt
- bij immuungecompromitteerde mensen die niet genoeg antistoffen aanmaken
- aanwezigheid van immuuncomplexen die bestaan uit Borrelia-antigenen en specifieke antilichamen daarvoor en voorkomen de detectie van antilichamen door serologische methoden
Als de patiënt vermoedt symptomen van de ziekte van Lyme te hebben en de serologische testresultaten zijn negatief, kan een moleculaire test op basis van de PCR-methode worden uitgevoerd.
DNA van Borrelia-spirocheten kan worden gedetecteerd in de vroege stadia van infectie, omdat het aantal spirocheten in lichaamsvloeistoffen dan het hoogst is.
Bij de diagnose van Lyme-borreliose worden voornamelijk serologische methoden zoals ELISA gebruikt, maar in sommige klinische situaties is genetisch testen met behulp van de PCR-methode nuttig.
Hoe langer de tijd vanaf infectie, hoe kleiner de kans op detectie van bacterieel DNA. Daarom worden in sommige gevallen, voordat de PCR-test wordt uitgevoerd, bacteriën gedurende 1-2 weken op speciale media gekweekt en vervolgens wordt de test uitgevoerd.
Deze aanpak wordt gebruikt bij verdenking van de ziekte van Lyme en bij geoogst hersenvocht. In de late fase van infectie is het beter om een ELISA-test uit te voeren.
De PCR-methode mag niet worden gebruikt bij de routinediagnose van de ziekte van Lyme vanwege het gebrek aan standaardisatiebetreffende het voorkomen van Borrelia burgdorferi-rassen in Polen
In het geval van problemen bij de diagnose (vooral in het vroege stadium van de ziekte), is het resultaat van de PCR-test echter nuttig bij het diagnostische proces.
Een positief testresultaat betekent dat de aanwezigheid van Borrelia burgdorferi-DNA en zijn varianten is gedetecteerd in het geteste materiaal, maar het verklaart niet of het organisme actief is geïnfecteerd. Anderzijds sluit een negatief resultaat de aanwezigheid van bacteriën in het lichaam niet uit.
Sommige laboratoria bieden testen aan op de aanwezigheid van Borrelia-DNA in de teek. Het resultaat van een dergelijke test is echter niet de basis voor de diagnose van de ziekte van Lyme bij een gebeten persoon.
PCR - resultaten. Kunnen het valse positieven zijn?
PCR is een ultragevoelige methode en tegelijkertijd zeer gevoelig voor besmetting. Daarom is het bij PCR-gebaseerde testen erg belangrijk om een geschikte interne controle te selecteren om fout-positieve resultaten uit te sluiten.
Correcte verzameling van materiaal voor tests, evenals de ervaring en betrouwbaarheid van de diagnosticus die de test uitvoert, zijn ook van cruciaal belang.
PCR - resultaten. Kunnen ze vals-negatief zijn
Zoals bij elke laboratoriumtest, kunnen ook bij de PCR-methode vals-negatieve resultaten optreden. Hier is het van cruciaal belang om bloed te verzamelen voor een geschikt antistollingsmiddel, omdat sommige ervan, zoals heparine, de PCR-reactie kunnen remmen.
Het verzamelen van materiaal na het starten van antibiotische therapie kan de efficiëntie van de PCR-reactie verminderen en de kans op fout-negatieve resultaten vergroten.
Er moet ook aan worden herinnerd dat Borrelia-bacteriën een zeer korte tijd in het bloed en lichaamsvloeistoffen leven, omdat ze dankzij speciale receptoren zeer snel doordringen tot "moeilijk bereikbare" plaatsen in het lichaam.
Daarom, in tegenstelling tot de diagnostiek van andere micro-organismen, is het aantal Borrelia-spirocheten in biologisch materiaal klein, soms zelfs op de detectielimiet van de PCR-methode. Dit kan ook een vals negatief veroorzaken.
Referenties
- Dunaj J. et al. Het belang van de PCR-methode bij de diagnose van Lyme-borreliose. Bladeren Epidemiol. 2013, 67, 119 - 123.
- Laboratoriumdiagnostiek van door teken overgedragen ziekten Aanbevelingen van de werkgroep: Nationale Kamer van Laboratoriumdiagnostica, Rijksinstituut voor Volksgezondheid-Nationaal Instituut voor Hygiëne, Nationaal adviseur op het gebied van infectieziekten, Afdeling Infectieziekten en Neuro-infecties , Medische Universiteit van Białystok, Poolse Vereniging voor Virologie, Warschau 2014.
- Ružić-Sabljić E. en Cerar T. Vooruitgang in de moleculaire diagnose van de ziekte van Lyme. Deskundige ds. Mol Diag. 2022jan; 17 (1): 19-30.
- Valones M.A.A. et al. Principes en toepassingen van polymerasekettingreactie op medisch-diagnostische gebieden: een overzicht. Braz J Microbiol. 2009 jan-mrt; 40 (1): 1-11